ELISA test otkriva brojne bolesti, zbog čega se široko koristi u medicini i više. Međutim, ELISA test je najpoznatiji po svojoj dijagnozi lajmske bolesti. Što je ELISA test? Kako interpretirati rezultate? Koja je cijena testa?

Sadržaj:

  1. ELISA test - što otkriva? Upotreba ELISA-e
  2. ELISA test - što je test?
  3. ELISA test i lajmska bolest - kada izvršiti?
  4. ELISA test - cijena. Koliko košta ELISA test?
  5. ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno pozitivni?
  6. ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno negativni?

ELISA test , tj. enzimski imunosorbentni test, uobičajena je laboratorijska metoda koja služi, između ostalog, za kvantitativno otkrivanje antitijela u krvi.

Zbog ovogELISA testpronađenaprimjenau dijagnostici bakterijskih bolesti, kao što jelajmska bolest s Lymeom.

Prednost ELISA metode je njena jednostavnost, brzo izvođenje i visoka osjetljivost. Metoda ELISA provodi se pomoću posebnih plastičnih ploča s jažicama ispunjenim npr. Borrelia proteinima (antigenima) i specifičnim monoklonskim antitijelima, koji su dizajnirani za otkrivanje antitijela u uzorku pacijenta.

ELISA test - što otkriva? Upotreba ELISA-e

Visoka osjetljivost i jednostavnost ELISA metode učinile su je primjenjivom u dijagnostici mnogih bolesti, ali je najpoznatija kao dijagnostička metoda lajmske bolesti.

U dijagnostici lajmske borelioze, tzv. neizravna ELISA, koja omogućuje otkrivanje specifičnih IgM ili IgG u ispitivanom materijalu. Na isti način, antitijela se mogu otkriti u dijagnostičke svrhe:

  • virusne infekcije: herpes virusi (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusi hepatitisa (HBV i HCV)
  • protozojske infekcije: toksoplazmoza, giardijaza
  • autoimune bolesti: celijakija (anti-tTG ili anti-DPG protutijela), Hashimotova bolest (anti-TG i anti-TPO protutijela), upalne bolesti crijeva (anti-ASCA i anti-ANCA antitijela)
  • parazitske bolesti i alergije,u kojima se detektiraju specifična IgE antitijela. Njihova povećana razina može ukazivati ​​na prisutnost alergija, npr. na pelud i hranu, ili parazitske invazije (oružana trakavica, ljudska okrugla glista)

Postoje i modifikacije ELISA metode (tzv. sendvič ELISA), koje omogućuju otkrivanje testiranog uzorka proteina koji nisu antitijela. Tada je cilj istraživanja otkriti u biološkom materijalu:

  • fragmenti virusa ili bakterija, najčešće su to antigeni specifični za određeni patogen
  • serumski hormoni, npr. estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
  • enzimi npr. kalprotektin, pankreatična elastaza, alkalna fosfataza
  • tumorski markeri, npr. CA-125
  • prisutnost lijekova u serumu

Ova metoda se također koristi u prehrambenoj industriji, gdje se mogu otkriti količine alergena u tragovima (npr. mlijeko, kikiriki), GMO ili toksina u hrani.

ELISA test - što je ovo test?

Dijagnoza npr. lajmske borelioze pomoću ELISA metode sastoji se u otkrivanju imunoloških proteina u biološkom materijalu - antitijela koja nastaju tijekom odgovora na antigene borelije.

Antitijela se testiraju u dvije klase, IgM i IgG. IgM su prva antitijela koja se pojavljuju u tijelu nakon kontakta s bakterijama i koja s vremenom opadaju.

Njihovo mjesto zauzimaju postojanija IgG antitijela koja mogu ostati u tijelu nekoliko desetaka godina.

Na taj se način posredno testira prisutnost bakterija u tijelu otkrivanjem antitijela specifično usmjerenih protiv Borrelia spirohete.

Protutijela u različitim fazama infekcije mogu biti usmjerena protiv raznih proteina Borrelia. Na primjer, u ranoj fazi to je protein p41.

U kasnijim fazama počinje se pojavljivati ​​sve više proteina, kao što su p21, p30, p39, p43. Zbog toga je dijagnoza lajmske bolesti izuzetno teška.

Odabir bakterijskih proteina iznimno je važan kako bi test imao visoku dijagnostičku vrijednost. Stoga bi se rutinski u dijagnozi lajmske bolesti trebali koristiti ELISA testovi II ili III generacije, u kojima se skupovi proteina odabiru tako da se dobije najpouzdaniji rezultat.

ELISA test i lajmska bolest. Kada nastupiti?

Lajmska borelioza je bakterijska bolest uzrokovana bakterijom Borrelia burgdorferi i njezinim brojnim vrstama.

Dijagnoza bolesti nije laka zbog složenosti imunološkog odgovora na borelije i nesavršenosti laboratorijskih metoda.

Najraširenija laboratorijska metoda je vrlo osjetljiva ELISA metoda koja otkriva specifična antitijela podignuta protiv bakterijskih proteina.

U dijagnozi lajmske borelioze koristi se indirektna ELISA metoda u kojoj se razlikuju sljedeće faze:

  • inkubacija jažica na ploči s materijalom prikupljenim od pacijenta, npr. serumom. Ako u ispitivanom materijalu postoje antitijela protiv borelije, ona se vežu na proteine ​​na dnu reakcijske jažice
  • zatim se višak seruma ispere posebnom tekućinom za pranje (puferom) i tzv. konjugat, tj. antitijelo povezano na enzim koji se veže na prethodno povezana antitijela u reakcijskim jažicama
  • Supstrat za konjugat se dodaje kasnije i nema (pozitivna) ili nema reakcije boje (negativna)
  • posljednji korak je očitavanje od strane čitača (spektrofotometra) koncentracije antitijela protiv borelije u serumu pacijenta

ELISA metoda za lajmsku bolest radi se krvlju, a u slučaju neuroloških simptoma (neuroborelioza) i likvorom.

Sinovijalnu tekućinu ne treba testirati jer postoji velika vjerojatnost lažno pozitivnih rezultata.

Osnova za dijagnozu bolesti su klinički simptomi koji je upućuju, potvrđeni rezultatima laboratorijskih pretraga.

Dodavanje rezultata laboratorijskog testa bez prisutnosti simptoma ne odobrava dijagnozu lajmske bolesti, jer se pokazalo da se antitijela na spirohete Borrelia otkrivaju i kod zdravih ljudi.

Serološka dijagnoza lajmske borelioze počinje semi-kvantitativnim ELISA testom probira. Ako je rezultat negativan, to znači da nisu otkrivene spirohete Borrelia ili je rezultat lažno negativan.

Ako je rezultat pozitivan ili slabo pozitivan (dvosmislen), potvrdno Western blot testiranje, koje je vrlo specifično.

Ovo je za potvrdu "istinitosti" rezultata dobivenih ELISA metodom. Tijekom dijagnostike ne možete preskočiti nijedan od gornjih koraka i, na primjer, provesti dijagnostiku pomoću Western blot metode ili postaviti dijagnozu na temelju pozitivnog rezultata samo pomoću ELISA metode.

U Poljskoj dijagnoza lajmske bolesti vrlo često završava u prvoj fazi probira, što uzrokuje pogrešnu interpretaciju pozitivnih ili slabo pozitivnih rezultata.

Vrijedi znati

ELISA test - cijena. Koliko košta ELISA test?

Test košta oko 60zlota i izrađuje se odmah. Međutim, možete pričekati oko tri mjeseca na rezultate preporuke.

ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno pozitivni?

Lažno pozitivni rezultati su rezultat unakrsne reaktivnosti IgM antitijela s drugim proteinima. Antitijela koja proizvodi tijelo mogu "pogrešno" prepoznati antigen drugih mikroorganizama kao Borrelia antigen.

Najčešće se "greške" događaju kod osoba zaraženih treponemom pallidum, virusima herpesa te kod osoba sa sistemskim eritematoznim lupusom i drugim reumatskim bolestima.

ELISA test - rezultati. Mogu li biti lažno negativni?

Lažno negativni rezultati mogu se pojaviti u ranoj fazi infekcije, a zatim test treba ponoviti nakon otprilike 3-4 tjedna. Ovo se zove serološki prozor, tj. početno razdoblje infekcije u kojem tijelo još nije "uspjelo" proizvesti specifična antitijela.

Slično, kod imunokompromitiranih ljudi koji ne stvaraju dovoljno antitijela.

Veliki problem, posebno kod vrlo intenzivnih infekcija, je pojava tzv. imunološki kompleksi koji se sastoje od antigena Borrelia spirochetes i specifičnih antitijela za njih.

Ovo čini antitijela "nevidljivima" za najčešće korištene metode kao što je ELISA, a iako su prisutna u testiranom materijalu, ne mogu se otkriti.

U takvim slučajevima, laboratorij može koristiti razbijanje imunoloških kompleksa. Ovaj tretman je osmišljen za oslobađanje antitijela. Međutim, ova metoda nije široko korištena zbog nedostatka standardizacije u laboratorijima.

Vrijedi znati

Zašto dijagnoza lajmske bolesti nije laka?

To je zbog složenosti imunološkog odgovora na borelije i ograničenja laboratorijskih metoda. Raznolikost sorti i pojava novih infekcija koje uzrokuju infekcije, posebno na europskom kontinentu, ne olakšava razvoj učinkovitih dijagnostičkih metoda.

U Europi se nedavno pojavilo više sorti, kao što su Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana i Borrelia spielmanii. Osim toga, u tijelu se spirohete Borrelia mogu pretvoriti u ciste ili ostati na mjestima u tijelu nedostupnima stanicama imunološkog sustava.

Biti tako "nevidljiv" za imunološki sustav. Osim toga, pokazalo se da tkiva mogu sadržavati fragmente bakterija koje imaju snažna proupalna svojstva. Vjeruje se da su odgovorni za kronične simptome lajmske bolesti, unatoč negativnim rezultatima studijelaboratorij.

Reference

1. Witecka-Knysz E. i dr. Lajmska bolest: zašto je dijagnoza tako teška? Laboratorijski dijagnostičar travanj 2007.2. Moore A. i dr. Trenutne smjernice, uobičajene kliničke zamke i budući smjerovi za laboratorijsku dijagnostiku lajmske bolesti, Sjedinjene Američke Države. Emerg Infect Dis. srpnja 2016; 22 (7) .3. Laboratorijska dijagnostika bolesti koje prenose krpelji Preporuke Radne skupine: Nacionalna komora laboratorijskih dijagnostičara, Nacionalni zavod za javno zdravstvo-Nacionalni institut za higijenu, Nacionalni savjetnik za područje zaraznih bolesti, Zavod za zarazne bolesti i neuroinfekcije, Medicinsko sveučilište Białystok, Poljsko društvo za virusologiju, Varšava 2014. Hosseini S. i co: Enzimski imunosorbentni test (ELISA) od A do Z. Springer 2022.

O autoruKarolina Karabin, dr.med., molekularni biologinja, laboratorijska dijagnostičarka, Cambridge Diagnostics PolskaPo struci biolog, specijaliziran za mikrobiologiju, te laboratorijski dijagnostičar s preko 10 godina iskustva u laboratorijskom radu. Diplomirala je na Visokoj školi za molekularnu medicinu i članica Poljskog društva za humanu genetiku. Voditeljica stipendija za istraživanje u Laboratoriju za molekularnu dijagnostiku na Odjelu za hematologiju, onkologiju i unutarnje bolesti Medicinskog sveučilišta u Varšavi. Obranila je titulu doktorice medicinskih znanosti iz područja medicinske biologije na 1. Medicinskom fakultetu Medicinskog sveučilišta u Varšavi. Autor mnogih znanstvenih i popularno-znanstvenih radova iz područja laboratorijske dijagnostike, molekularne biologije i prehrane. Svakodnevno, kao specijalist iz područja laboratorijske dijagnostike, vodi odjel sadržaja u Cambridge Diagnostics Polska te surađuje s timom nutricionista u CD Dietary Clinic. Svoja praktična znanja o dijagnostici i dijetoterapiji bolesti dijeli sa specijalistima na konferencijama, treninzima te u časopisima i web stranicama. Posebno ju zanima utjecaj suvremenog načina života na molekularne procese u tijelu.

Kategorija:

Istraživanje